Far-Western
用western方法对转移到膜上的蛋白质或直接在电泳胶上进行蛋白质相互作用分析,结合化学发光检测技术。PIERCE在该领域有ProFound
Far-Western Biotinylated-和GST-蛋白:蛋白互作检测试剂盒。
原理图:
以ProFound Far-Western Biotinylated-蛋白:蛋白互作检测试剂盒为例:
纯化的“Bait”蛋白探针用生物素标记,“Prey”蛋白在PAGE胶内或已经转移至膜上,二者互作可用Streptavidin-HRP和HRP的化学发光底物检测。

(P568)
此系列试剂盒优点:
1,可以膜上或胶内直接检测。前者灵敏度高;后者快速,克服了转膜烦琐、低效的步骤
2,非放射性检测方法,用Biotin/Streptavidin-HRP或者anti-GST-HRP化学标记法,结合化学发光底物,使检测可靠、灵敏、安全。
3,适用于强蛋白相互作用力
4,无需一抗,用生物素或GST标记蛋白即可
5,适用于变性和非变性胶,尤其对于不确定蛋白相互作用条件时非常有用
6,非特异性结合少,特异性结合能力强
7, 在化学发光检测后可以用常规蛋白染色试剂染色
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